Diabetologia：激活但功能受損的記憶Tregs在1型糖尿病患者進展緩慢的更進一步中逐漸擴展

從第一次注意到肝巨噬細胞自身抗基底到注意到1M-癌癥診療癥狀的成效不下在兒童后期就有很好的描述，多個肝巨噬細胞自身抗基底乙型肝炎的兒童中會有70%在血清轉換后10年內中風癌癥，而隨訪15年的兒童這一%增高到84%。相對之下，占到診療1M-癌癥一半以上的M-1M-癌癥的肺癌機制還沒得到充分的分析。

越來越多的人開始采用有系統系統來界定1M-癌癥的成效：個基底在注意到多種肝巨噬細胞自身抗基底時進到第1階段，注意到血糖異常時進到第2階段，注意到癥狀時進到第3階段。一些多發肝巨噬細胞自身抗基底乙型肝炎的個基底，在1期和2期，成效快速，并發展為肺癌的1M-癌癥。我們前描述了一都由在首次檢測到多種肝巨噬細胞自身抗基底檢驗后大概10年無癌癥的近乎快成效者，這都由病變人口數少，但特點比較明確。隨后，我們辨認出肝巨噬細胞自身蛋白特異性CD8+T巨噬細胞中間體在成效減快的病變中會基本不不存在，但在近期肺癌和長期不存在的癌癥病變中會很容易檢測到。這似乎斷定，與成效病變相對，這些病變免疫中間體的平衡增強。

晚期分析斷定，盡管平衡性T巨噬細胞(Treg)數量正常，但癌癥病變不存在一些基本功能缺陷，其中會包含對IL-2的中間體能力減小。此外，癌癥病變中會的畸變CD4+T巨噬細胞似乎對平衡比較具抵抗性，體現為畸變T巨噬細胞的減緩增強，自然激發的Treg和基底外激發的作用于Treg，以及蛋白經歷的CD4+T巨噬細胞中會IL-2中間體增強。本分析的目的是描述了CD4+平衡性T巨噬細胞(Treg)在一小群近乎減快成效者中會的特點，他們的平均年齡為43歲(31-72歲)，隨訪時間為18-32年。

步驟：BOX分析是一項以人群相結合的縱向分析，在21歲以下確診的病變親屬中會檢測1M-癌癥的危險因素。我們前描述了長期減快成效者的特點，他們保持一致多重肝巨噬細胞自身抗基底乙型肝炎最少10年，但沒注意到癌癥的診療癥狀，快性或非展開性免疫。隨后，10名暫時保持一致無癌癥并愿意提供大量血漿檢驗的減快成效者納入T和B巨噬細胞基本功能統計分析。在目前的分析中會，8名快成效者(SP都由)，中會位年齡43歲(31-72歲)，18 - 32歲間的肝巨噬細胞自身抗基底乙型肝炎。所有的參與者都處于1M-癌癥成效的1期，盡管一些人隨后耗盡了肝巨噬細胞自身抗基底對某些蛋白的乙型肝炎中間體，然而，一名病變已經處于2期大概6年，但沒注意到診療癥狀，一名病變被診斷為癌癥，該受試者72歲，在采集試驗中檢驗時，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在數據統計分析中會對該供基底展開了單獨審核分裂。轉化外周血單個核分裂巨噬細胞(PBMCs)，選用多參數流式巨噬細胞術和T巨噬細胞減緩試驗中審核分裂供基底中會Treg的頻不下、基因M-和基本功能。采用FlowSOM和CITRUS(聚類鑒定、特別聯和回歸)展開無監督聚類統計分析，審核分裂Treg基因M-。

結果：與健康供基底相對，來自快成效基底的遺忘CD4+T巨噬細胞的監督聚類推測，觸發著的遺忘CD4+ Treg頻不下增高，與糖皮質激素作用于的TNFR特別蛋白(GITR)傳達增高有關。一名HbA1c增高的病變與成效減快者和意味著的對照都由相對，Treg對光有所不同?；竟δ芙y計分析斷定，與健康供基底相對，來自減快成效基底的Treg內源性的CD4+畸變T巨噬細胞減緩值得注意損壞。體現為對畸變CD4+T巨噬細胞CD25和CD134傳達的減緩增高。

上圖1 深入的基因M-統計分析推測，CD4+Treg亞M-在快成效函數調用中會增高。由FlowSOM降解的Treg室，聚集在來自所有供基底的活著CD4+CD45RA -巨噬細胞上。根據標示出物傳達鑒定出10個元簇:遺忘T巨噬細胞_1;遺忘T cell_2;遺忘T cell_3;遺忘T cell_4;CD49b遺忘T巨噬細胞;HLA-DR + GITR +遺忘T巨噬細胞;閃存Treg_1;閃存Treg_2;閃存Treg_3;和閃存Treg_4。(a)采用9個不同Treg標示出降解的10個元簇的MST。每個路由表均是由一個協同(100個協同)，較小的元協同(10個元協同)在路由表都由區域內上色。每個路由表中會的年糕上圖透露單個標示出的傳達級別。(b)每個元聚類的熱上圖，以推測整基底標示出傳達。(c, d)為HD都由(c)和SP都由(d)降解上圖，以及FlowSOM比對的每個元簇的覆蓋層。(e-l)比起總質量為每個metacluster罐終點站上圖(總質量> 0.05%)確定為HD和SP都由:閃存Treg_2 (e),閃存Treg_3 (f),閃存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遺忘T巨噬細胞(h)、遺忘T cell_1(i),遺忘T cell_2 (j),遺忘T cell_3 (k) n d CD49b遺忘T巨噬細胞(l)。橙色邊框均是由捐贈者SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon匹配大寫字母秩檢驗。此鍵適用于上圖形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上圖2 采用CITRUS的預測模M-證實，Treg頻不下的增高是成效減快的標志。分級特別聯(a - f)和大豆統計分析(g-k)比較SP參與者和意味著的HD參與者在CD4+CD45RA?T巨噬細胞上的差異。(a)親本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群基底的均是由性上圖。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3非金屬，然后通過HLA-DR和GITR傳達展開轉化，演示FlowSOM群基底。(b) HD(網紋)和SP(雜色)都由以及供基底SP 606(橙色)中會CD25+ cd127的頻不下概要上圖。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+特別聯閉包的罐終點站上圖;(c) HLA-DRloGITR?(閃存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(閃存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(閃存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+閃存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3傳達強度填充，箭頭突出的簇被比對為SP和HD函數調用間的不同。(j)罐終點站上圖推測了在SP(雜色)和HD(灰點)都由中會，CITRUS遺忘Treg_3和Treg_4的比起總質量(%)。(k)直方上圖推測每個簇的基因M-(粉紅色)和Treg標示出比起傳達與歷史背景傳達(深藍色);上列，閃存Treg_3;下面恰巧，閃存Treg_4。歷史背景與所有其他簇中會標示出的傳達有關。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon匹配大寫字母秩檢驗

上圖3 與健康獻血者相對，成效減快者遺忘treg的GITR增高。每個遺忘CD4+T巨噬細胞元簇(遺忘T巨噬細胞_1;遺忘T cell_2;遺忘T cell_3;CD49b +遺忘T巨噬細胞;HLA-DR + GITR +遺忘T巨噬細胞;閃存Treg_2;閃存Treg_3;來自FlowSOM的memory Treg_4)檢測每個傳達標示出的變化。(a,b)來自HD (a)和S (b)函數調用的傳達熱上圖(sp606不包含在內)。(c,d)遺忘Treg_4元簇中會所有HD(灰色)、所有SP(深藍色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR傳達串聯，推測直方上圖(c)和概要上圖(d)。Wilcoxon匹配大寫字母秩和檢驗，p< 0.07(橙色)所有供基底包含，p< 0.05(深藍色)供基底SP 606和意味著的HD不包含在測試中會。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中會GITR傳達，從分級特別聯，從所有HD(灰色)、所有SP(深藍色)和SP 606(橙色)串聯，推測直方上圖(e)和概要上圖(f) *p< 0.05, Wilcoxon匹配大寫字母秩檢驗

上圖4 來自減快成效的CD4+ treg巨噬細胞控制畸變CD4+T巨噬細胞的能力減小。SP都由用深藍色的終點站和邊框透露，HD都由用白色的終點站和邊框透露，橙色的終點站/邊框透露供基底sp606。采用CD4+CD25+ Treg分選試劑盒對CD4+T巨噬細胞展開分選。CD4+CD25?(此番者)被標示出為CFSE, Treg按觀察的%校準。用抗CD3 /28微珠活著化巨噬細胞，培育3同一天展開流式巨噬細胞術檢測。(a-d)與CD4+此番者比起應的treg培育(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg與HD此番者培育。(a,b,f) CFSE再生(a,e)和CFSE減緩比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的減緩比率。采用乙型肝炎對照(觸發著的響應巨噬細胞僅有treg)量化減緩比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重復測量雙向方差統計分析。?p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比較測試

上圖5 畸變CD4+T巨噬細胞對減快成效的T巨噬細胞活著化的減緩比較脆弱。SP都由用深藍色的終點站和邊框透露，HD都由用白色的終點站和邊框透露，橙色的終點站/邊框透露供基底sp606。采用CD4+CD25+Treg分選試劑盒對CD4+T巨噬細胞展開分選。CD4+CD25?(此番者)被cfsel標示出，treg按觀察的%校準。用抗CD3 /28微珠活著化巨噬細胞，培育3同一天展開流式巨噬細胞術(CD25反染)和巨噬細胞因弟統計分析。HD Treg與HD、SP或sp606此番者共同培育。(a,b) CFSE再生(a)和CFSE減緩百分不下(b)。(c,d) CD25減緩百分不下(c)和CD134減緩百分不下(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育中會的傳達。***p< 0.001， **p< 0.01，重復測量雙向方差統計分析。?p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比較測試

給出結論：我們給出的給出結論是，來自減快成效弟的活著化遺忘CD4+Treg在GITR傳達中會得到了擴充和豐富，闡釋了進一步分析Treg在1M-癌癥似乎性個基底中會的異質性的必要性。

標題出處：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28